Es ist wahrscheinlich, dass Lukas in Hafenstädten und auf Schiffen als Arzt tätig war, und während einer der Reisen des Apostels Paulus wurde er zu dessen praktischen Arzt. Der Tradition nach war er auch Maler, und seine Ikonen werden bis heute von der orthodoxen Kirche hochgeschätzt.
Es ist ungewiss, wann genau Lukas zum christlichen Glauben kam; einer Überlieferung zufolge war er einer der 70 Jünger Christi und somit möglicherweise ein Zeuge der Ereignisse des irdischen Lebens Jesu. Der erste nachweisbare Bericht über ihn findet sich in Troas, wo er sich dem Apostel Paulus anschloss. Er begleitete Paulus auf seiner Reise nach Mazedonien, und ab diesem Zeitpunkt wird in der Apostelgeschichte die erste Person Plural "wir" verwendet (Apg 16,9), was darauf hinweist, dass er zu dieser Zeit ein Teil der Gemeinschaft war. Seine Bekehrung wird nicht näher beschrieben, was darauf hindeutet, dass er Paulus bereits bekannt war, als er sich ihm anschloss.
Der heilige Lukas reiste mit dem Apostel nach Philippi und blieb anscheinend dort, da er im weiteren Verlauf der zweiten Missionsreise nicht erwähnt wird. Auf der dritten Reise schloss er sich dem Apostel erneut in Philippi an (Apg 20,6) und begleitete ihn via Milet, Tyrus und Cäsarea nach Jerusalem, wo er während der Unruhen, die zur Festnahme des Apostels führten, blieb. Seit diesem Zeitpunkt war er dauerhaft an seiner Seite. Lukas reiste mit Paulus nach Rom und erlebte die Schrecken eines schrecklichen Schiffbruchs, den er in der Apostelgeschichte detailliert beschreibt. Nach dem Tod des Apostels Paulus verliert sich die Spur von Lukas in den historischen Aufzeichnungen, doch er setzte das Werk seines großen Lehrers fort, der ihn in seinem zweiten Brief an die Korinther als "einen Bruder, der in allen Gemeinden wegen der Verkündigung des Evangeliums gepriesen wird", lobte. Laut Überlieferung erlitt Lukas den Märtyrertod und erhielt damit eine Krone, die ihn den meisten Aposteln gleichstellt. Er soll sein Evangelium um 60 n. Chr. verfasst haben.
Während seiner Reisen mit Paulus erlangte er ein tiefes Verständnis für das Evangelium und erkannte dessen nahezu stärkste und tiefste Ausgestaltung der Lehre Christi, sowohl als Augenzeuge der Werke Jesu als auch im Detail. Inspiriert vom heiligen Geist schrieb er das Evangelium für einen gewissen "ehrwürdigen Theophilus", der in der christlichen Gemeinschaft offenbar hoch angesehen war und die "feste Grundlage der Lehre, in der er unterrichtet worden war, kennen wollte". Zu diesem Zeitpunkt waren bereits das Matthäus- und das Markusevangelium sowie verschiedene Berichte über bekannte Ereignisse verbreitet; dennoch wollte Lukas "nach sorgfältigem Studium dieser Evangelien sowie weiterer Erzählungen" die "feste Grundlage der Lehre herausfinden". Er beabsichtigte, dem ehrwürdigen Theophilus "nach sorgfältigem Studium aller Dinge das irdische Leben des Erlösers der Reihe nach zu beschreiben" und stützte sich dabei auf eigene Erfahrungen sowie Berichte von anderen "Augenzeugen und Dienern des Wortes" (Lk 1,1-4). Da Theophilus ein Heide gewesen sein könnte, richtete sich das gesamte Evangelium somit auch an Heidenchristen im Allgemeinen. Daher führt die Genealogie Christi nicht allein auf Abraham zurück, wie im Matthäusevangelium, sondern auf Adam als Stammvater aller Menschen. Das Leben Christi wird vorwiegend aus historischer Perspektive geschildert, und die Erzählung ist besonders in den ersten Kapiteln, in denen die Ereignisse vor der Geburt des Erlösers dargestellt werden, sehr detailliert. Das Evangelium umfasst 24 Kapitel und endet mit dem Bericht über die Himmelfahrt Christi, nach der die Apostel "mit großer Freude nach Jerusalem zurückkehrten und immer im Tempel blieben und Gott lobten und preisen".